蜱传脑炎病毒非结构蛋白1的原核表达、纯化及应用

摘要：

目的 原核表达、纯化蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)非结构蛋白1(non-structural protein 1,NS1),并评价其在蜱传脑炎(tick-borne encephalitis,TBE)临床诊断中的应用价值.方法 根据GenBank登录的TBEV"森张"株NS1基因序列设计引物,PCR扩增TBEV NS1基因,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-NS1,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经GST bestarose 4FF亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性;以重组NS 1蛋白为固相抗原,采用间接ELISA法检测临床血清.结果 重组表达质粒pGEX-4T-1-NS1经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约65 000,表达量为22.1％,主要以包涵体形式存在;纯化蛋白纯度达93％以上,与TBEV全病毒感染小鼠血清具有良好的反应原性.采用NS1作为包被抗原的间接ELISA法检测临床血清,特异性为95％,敏感度为100％.结论 成功在大肠埃希菌中表达并纯化了 TBEV NS1蛋白;作为病毒特异性抗原,经间接ELISA法验证,该蛋白在临床疾病的血清学诊断上具有一定的应用价值.

关键词：蜱传脑炎病毒、流行性乙型脑炎病毒、非结构蛋白1、原核表达、酶联免疫吸附测定

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分类号：R373.3+1;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：吉林省省级医药健康产业发展专项基金项目20170311010YY

在线出版日期：2023-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1351-1356