重组人白细胞介素-12注射液蛋白纯度反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立重组人白细胞介素-12(recombinant human interleukin-12,rhIL-12)注射液蛋白纯度反相高效液相色谱(reversephase high performance liquid chroomatography,RP-HPLC)检测方法,并进行验证.方法 采用 YMC C4 液相色谱柱(250 mm×4.6 mm)检测rhIL-12纯度.流动相A:0.05％三氟乙酸-水溶液;流动相B:0.05％三氟乙酸-乙腈溶液;流速为:1.0 mL/min;柱温为:30℃;检测波长为:280 nm;进样量为:1 000 μL;进行梯度洗脱.验证方法的专属性、精密性和耐用性,并确定检测限及定量限.同时采用建立的方法检测3批rhIL-12注射液的蛋白纯度.结果 rhIL-12注射液的保留时间为16.957 min,积分范围内可见单一目的峰;空白溶剂(流动相A、流动相B、制剂Buffer)在积分范围内均无吸收峰;rhIL-12注射液降解峰杂质与目的峰分离情况良好,分离度为2.58,理论塔板数为17 666;同一实验员连续6次检测的主峰保留时间、主峰面积及主峰百分比RSD均＜2.0％,不同实验员间的RSD＜2.0％;0.9、1.0和1.1 mL/min 3个流速检测rhIL-12注射液的主峰百分比RSD为0.05％,28、30、32℃3个柱温条件下检测主峰百分比RSD为0.09％;该方法的检测限为0.06 μg,定量限为0.58 μg.批号为201807002、201807004、2018080063批rhIL-12注射液蛋白纯度分别为99.88％、99.00％和99.53％.结论 建立的RP-HPLC法具有良好的专属性、精密度及耐用性,且操作简单、结果准确,适用于浓度为15 μg/mL的rhIL-12注射液蛋白纯度的检测.

关键词：反相高效液相色谱法、人白细胞介素-12、注射液、蛋白纯度

所属期刊栏目：35

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：山东省重大科技创新工程项目2018CXGC1404

在线出版日期：2022-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1224-1230