牛坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的 制备坏死杆菌(Fusobacteriumn necrophorum)白细胞毒素(leukotoxin)PL2蛋白单克隆抗体,并鉴定其生物学特性.方法 原核表达并纯化坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白,腹腔注射免疫BALB/c雌性小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,并用GST标签蛋白对阳性孔进行二次反向筛选,针对亚克隆后稳定分泌PL2蛋白单克隆抗体的细胞株制备腹水,对单克隆抗体进行抗体效价检测、抗体亚类和Western blot鉴定及杂交瘤染色体分析.结果 成功筛选出1株稳定分泌坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2D5;杂交瘤细胞培养上清和腹水效价分别为1 ∶ 6 400和1 ∶ 105;单克隆抗体重链为IgG3,轻链为κ链;杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体分别可与坏死杆菌培养液浓缩上清和重组PL2蛋白发生特异性反应,且与GST标签蛋白无反应;杂交瘤细胞染色体数目为102条,与预期一致.结论 成功制备了牛坏死杆菌白细胞毒素PL2蛋白单克隆抗体,为坏死杆菌白细胞毒素致病机制的研究提供了工具.

关键词：坏死杆菌、白细胞毒素、PL2蛋白、单克隆抗体

所属期刊栏目：35

分类号：S855.1+2(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家自然科学基金;黑龙江八一农垦大学校内培育课题

在线出版日期：2022-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1118-1122,1127