结核分枝杆菌Rv3873抗原的同源表达及其在结核病血清学诊断中的应用

摘要：

目的 在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)中克隆并表达结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mtb)RD1区蛋白Rv3873,并评价其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值.方法 以Mtb H37Rv标准株全基因组DNA为模板,扩增得到rv3873基因完整序列,克隆至分枝杆菌表达载体pMF406,构建重组质粒pMF406-rv3873,电转化至Msm mc2155,加入乙酰胺诱导表达Rv3873同源重组蛋白(mRv3873),利用亲和层析进行纯化,Western blot分析抗原特异性;ELISA法检测27份TB患者和31份健康者血清IgG抗体,以大肠埃希菌表达的Rv3873(rRv3873)和免疫优势抗原Ag85A作为对照抗原,评价mRv3873在TB血清学诊断中的作用.结果 在Msm中成功表达了重组Mtb蛋白mRv3873,主要以可溶形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化可获得高纯度(95％)的可溶性重组蛋白,蛋白浓度约为2.0 mg/mL;TB患者组血清中抗mRv3873和Ag85A抗原特异性IgG水平均显著高于健康组(P＜0.05),而两组血清rRv3873特异性IgG水平差异无统计学意义(P＞0.05);mRv3873抗原与对照抗原Ag85A的诊断效能相当,ROC曲线下面积分别为0.776 0和0.778 4,显著高于异源表达抗原rRv3873的曲线下面积(0.586 6).结论 在快速生长分枝杆菌Msm中可高水平表达并纯化MtbRD1区抗原Rv3873,较之异源表达抗原,TB患者产生针对mRv3873的IgG水平显著高于健康人群,分枝杆菌同源表达的mRv3873具有作为TB血清诊断的潜力.

关键词：结核分枝杆菌、RD1区抗原、同源表达、结核病、血清学诊断

所属期刊栏目：35

分类号：R378.912(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2022-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1069-1075