Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞残余DNA荧光定量PCR检测方法及其相应质量标准的建立
目的 建立与国际接轨的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliovirus vaccine made from Sabin strain,sIPV)Vero细胞残余DNA荧光定量PCR(q-PCR)检测方法及相应质量标准.方法 按照《中国药典》三部(2020版)通则3407第三法,选择通则建议的Vero细胞核酸引物和探针,通过优化磁珠法提取核酸以及PCR反应体系和条件,采用q-PCR法Vero细胞DNA定量国家标准品,对sIPV产品进行线性范围、精密度和回收率验证.在此基础上,与国内5家sIPV生产研究企业和2家省药检院协作开展适用性验证的研究,并对检测结果进行统计分析,建立q-PCR法检测sIPV成品Vero细胞DNA残留量的可接受限度标准.结果 优化的q-PCR方法在0.002～200 pg/μL范围内呈良好的线性关系,R2=0.999;精密度验证结果试验内、试验间变异系数分别为16.7％和27％;样品回收率在50％～150％范围内,RSD≤30％,符合《中国药典》三部(2020版)通则3407第三法相关要求.协作研究各企业sIPV成品Vero细胞DNA残留量平均为0.07～7.8 pg/剂,检测结果最大值＜50 pg/剂,各实验室显示出良好的适用性;用q-PCR法检测已知50 pg Vero细胞核酸标准品(杂交法用),共获得55个有效检测值,统计计算结果为50.00 pg(95％CI:44.00～56.01 pg),与理论值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功建立了 sIPV产品适用的Vero细胞残余DNA q-PCR检测方法,该方法具有良好的适用性,可用于sIPV成品的质量评价,限度标准定为不高于50 pg/剂具有可行性.
Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗、Vero细胞、残余DNA、荧光定量PCR
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R392-33
国家科技重大专项;国家药典委员会药品标准提高课题
2022-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
981-985,991
