甲型H1N1流感病毒mRNA疫苗的制备及其免疫原性评价
目的 制备甲型H1N1流感病毒mRNA疫苗,并评价其免疫原性.方法 设计并构建分别含有甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的模板质粒,通过单酶切反应制备线性化转录模板,体外转录合成HA-mRNA和EGFP-mRNA.EGFP-mRNA体外转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察荧光表达情况.利用纳米药物制备系统制备HA-mRNA脂质体纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNPs),即HA-mRNA-LNPs,测量粒径并计算包封率.用含2和10 μg HA-mRNA的HA-mRNA-LNPs经肌肉分别免疫BALB/c小鼠,同时设LNPs组(等体积未包裹mRNA的LNPs)和阴性对照组(等体积PBS),3周后进行加强免疫,免疫剂量和途径同上.加强免疫后3周,经小鼠眼眶后静脉丛采血,分离血清,采用血凝抑制(haemagglutination inhibition,HI)试验和病毒微量中和(microneutralization assay,MN)试验分别检测血凝抑制抗体滴度及中和抗体水平,并计算几何平均滴度(geometric average titer,GMT).结果 EGFP-mRNA转染HEK293T细胞后,镜下可见明显EGFP表达.HA-mRNA-LNPs的颗粒平均直径为70.2 nm,聚合物分散性指数为0.15,包封率约为80％.与阴性对照组比较,LNPs组小鼠血清的HI GMT和MN GMT差异均无统计学意义(P＞0.05),2和10 μg剂量组均显著升高(P均＜0.000 1);10 μg剂量组均显著高于2 μg剂量组(P均＜0.01).结论 制备的甲型H1N1流感病毒mRNA疫苗在BALB/c小鼠模型中具有较好的免疫原性,本研究为流感mRNA候选疫苗的研发提供了实验依据.
流感病毒、mRNA疫苗、甲型H1N1、脂质体纳米颗粒、免疫原性
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R373.1+3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家科技重大专项;国家科技重大专项
2022-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
907-911,917
