基于血管紧张素转换酶2受体表达的SARS-CoV-2假病毒中和活性检测方法的建立及验证
目的 建立基于血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)受体表达的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)假病毒中和活性检测方法,并进行验证.方法 采用流式细胞术和qPCR法分别检测Huh-7及HEK293T-hACE2细胞中ACE2受体蛋白表达和ACE2受体基因mRNA转录水平.选择ACE2受体蛋白表达及mRNA转录水平较高的细胞建立SARS-CoV-2假病毒中和活性检测方法,并优化病毒滴度、细胞浓度及抗体浓度.验证方法的准确性、线性范围、精密性及专属性.评价建立方法对假病毒拉姆达及德尔塔变异株的适用性.结果 HEK293T-hACE2细胞中ACE2受体蛋白表达和ACE2受体基因mRNA转录水平远高于Huh-7细胞,因此采用HEK293T-hACE2细胞建立SARS-CoV-2假病毒中和活性检测方法.最佳病毒滴度为 2.6×104TCID50/mL,细胞浓度为 4×1054 个/mL,抗体浓度为 100 nmol/L.150％、130％、100％、70％、50％5个相对活性浓度的SARS-CoV-2抗体参考品(简称参考品)的回收率在80％～120％范围内;参考品在50％～150％相对活性浓度范围内实际检测值与理论值呈良好线性关系,线性方程为:Y=1.061 X-7.72,R=0.947 2;精密性验证CV 均＜10％;参考品的相对活性浓度与抑制率可拟合成四参数拟合曲线,重组抗RANKL人源化全单克隆抗体及制剂缓冲液均未显示曲线.假病毒拉姆达和德尔塔变异株的假病毒中和活性检测结果均可获得拟合曲线.结论 建立的基于ACE2受体表达的SARS-CoV-2假病毒中和活性检测方法具有良好的准确度、精密性、线性及专属性,有望应用于SARS-CoV-2抗体类药物早期筛选及研发过程中质量的控制.
血管紧张素转换酶2受体、HEK293T-hACE2细胞、SARS-CoV-2、假病毒、中和活性
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R392-33
国家自然科学基金81773679
2022-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
718-723,728
