鳉鱼肠激酶在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化及活性鉴定

摘要：

目的 利用大肠埃希菌表达系统实现鳉鱼肠激酶(enterokinase,EK)的可溶性表达,经纯化后获得具有酶切活性的重组鳉鱼EK.方法 通过基因工程技术,构建pGEX-EK重组质粒,转化至TransB(DE3)化学感受态细胞,IPTG诱导表达获得可溶的GST-EK融合蛋白,经谷胱甘肽(glutathione,GSH)亲和层析、离子交换层析,获得EK,并进行活性分析及酶切特异性试验.结果 pGEX-EK重组质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,经可溶性标签实现了具有生物活性的鳉鱼EK的可溶性表达,酶比活性为46 IU/mg,且具有较高的酶切特异性.结论 通过使用GST融合标签成功实现了鳉鱼EK在大肠埃希菌中的可溶性表达,为实现EK的可溶性表达提供了新思路.

关键词：肠激酶、鳉鱼、大肠埃希菌、可溶性表达、融合标签

所属期刊栏目：35

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：吉林省科技发展计划20160204034YY

在线出版日期：2022-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：678-684