大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基的原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要：

目的 原核表达大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基(heat-labile enterotoxin B subunit,LTB),并制备其多克隆抗体.方法 利用PCR技术扩增LTB基因,并将其连接至pET30a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒pET30a(+)-LTB-8 x His,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对目的蛋白表达条件进行优化.利用His镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,免疫大耳白家兔制备兔源抗LTB多克隆抗体.结果 重组原核表达质粒pET30a(+)-LTB-8×His经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组LTB蛋白相对分子质量约为13 000,以包涵体形式表达,最佳诱导条件为:用0.4 mmol/L IPTG于30℃诱导4 h;纯化后蛋白浓度为3.7 mg/mL;制备的多克隆抗体可用于LTB的Western blot及IFA检测.结论 利用大肠埃希菌表达系统成功表达了重组LTB蛋白,并制备了具有良好反应原性和特异性的多克隆抗体,为产肠毒素型大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)疾病的诊断及LTB黏膜免疫佐剂特性的研究奠定了基础.

关键词：大肠埃希菌、不耐热肠毒素B亚基、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：35

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2021YFD1801404

在线出版日期：2022-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：407-412,417