SARS-CoV-2 S蛋白单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立
目的 制备严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)棘突蛋白(spike protein,S)单克隆抗体(简称单抗),建立S蛋白抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证.方法 通过杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体,并对单抗进行鉴定.用该单抗作为包被抗体,HRP标记的兔抗S蛋白多克隆抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA方法,检测SARS-CoV-2 S蛋白抗原含量.对方法的包被抗体浓度(10、5、2.5、1.25 μg/mL)、酶标抗体浓度(4、2、1 μg/mL)以及封闭液种类(未封闭、PBS稀释的1％BSA、2％BSA、1％BSA+1％蔗糖、2％BSA+2％蔗糖)进行优化,并对方法的线性范围及灵敏度、特异性和准确性进行验证.用建立的方法对10份疫苗生产工艺不同阶段已知S蛋白抗原含量的样本进行检测,计算该方法与中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所新冠疫苗定量方法检测结果的符合率.结果 筛选出18株S蛋白特异性单克隆抗体,7B10A2细胞株制备的腹水抗体纯化后浓度为4.487 mg/mL,纯度大于90％,可特异性结合新冠病毒S蛋白上S1亚基;抗体亚型为IgG2b型,抗体效价为1:128 000,效应浓度为0.137 μg/mL.建立的双抗体夹心ELISA方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为5和4 μg/mL,最适封闭液为2％BSA+2％蔗糖;在2.5～160 U范围内,相关系数(R2)大于0.99,检测灵敏度为1.25 U;该方法特异性良好,与核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)、BSA、PBS及流感病毒等不发生反应;准确性验证的回收率在92.10％～111.58％之间.用建立的方法检测已知含量样本符合率在94.2％～109％之间.结论 制备了 SARS-CoV-2 S蛋白特异性单抗,并建立了适用于SARS-CoV-2 S蛋白抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,可用于疫苗产品及其工艺阶段样品和其他样本中S蛋白含量的检测.
严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型、单克隆抗体、双抗体夹心ELISA
35
R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金;中国医学科学院医学与健康科技创新工程
2022-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
327-333
