严重急性呼吸综合征冠状病毒2核衣壳蛋白的制备及其初步应用

摘要：

目的 在大肠埃希菌中表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N蛋白),并进行纯化,用于制备SARS-CoV-2检测试剂.方法 将含N蛋白基因的重组质粒pET28a转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达N蛋白,考察Ni柱亲和层析与SP强阳离子交换层析和CM弱阳离子交换层析对重组N蛋白的纯化效率,制备胶体金免疫检测试剂并检测灭活血清.结果 表达的重组N蛋白相对分子质量约49 000,表达量约占包涵体总蛋白的30％.Ni2+亲和层析对重组N蛋白的选择性较低,通过强阳离子交换与弱阳离子交换两步层析,实现了重组N蛋白在色谱柱上的复性和纯化,纯度大于90％.以此制备的免疫胶体金检测试剂可初步用于血清中相应抗体的检测.结论 复性后的重组N蛋白,具有较好的生物活性,可用于诊断试剂开发,复性工艺对其他重组蛋白质的纯化具有借鉴意义.

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2、核衣壳蛋白、包涵体、复性、纯化、免疫胶体金检测试剂

所属期刊栏目：35

分类号：R446.61(诊断学)

资助基金：湖南省自然科学基金;湖南省教育厅科学研究基金;湖南省卫生健康委科研计划项目

在线出版日期：2022-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：184-188