青海血蜱重组rHq002蛋白包涵体的纯化

摘要：

目的 对青海血蜱重组rHq002蛋白包涵体进行复性及纯化.方法 将重组质粒pET-30a-Hq002转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组Hq002蛋白;超声破碎菌体,收集细胞碎片,用PBS缓冲液和低浓度尿素进行多次洗涤;洗涤后的包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解,稀释法进行蛋白复性;用镍离子亲和层析法纯化蛋白后,分别于4和-20℃保存7d后进行12％ SDS-PAGE鉴定.结果 经PBS缓冲液和低浓度尿素多次洗涤,可去除大量的水溶性杂质和部分水不溶性杂蛋白,初步纯化了包涵体;包涵体经6 mol/L盐酸胍溶解后可直接稀释复性重组蛋白;经镍离子亲和层析纯化后的蛋白相对分子质量约27000,与预期相符,4和-20℃保存7d未出现降解或者聚集.结论 成功获得含二硫键的蜱源重组蛋白,本研究的复性纯化方法可为纯化包涵体蛋白提供参考.

关键词：蜱源蛋白质;包涵体;复性;纯化

所属期刊栏目：35

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金;内蒙古自然科学基金项目;内蒙古医科大学科技百万工程项目

在线出版日期：2022-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：91-94,99