长效生长激素相关蛋白含量检测反相高效液相色谱法的建立及验证
目的 建立长效生长激素(recombinant human growth hormone-Fc,rhGH-Fc)相关蛋白含量检测的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,并进行验证.方法 通过质谱肽图法进行rhGH-Fc相关蛋白结构解析后建立相关蛋白含量检测的方法,优化梯度洗脱方法和流动相方案,并对该方法进行重复性、专属性、耐用性验证,确定检测限和定量限.用建立的方法检测rhGH-Fc氧化加速试验样品、脱酰胺加速试验样品及不同批次纯化液样品.结果 建立的RP-HPLC法色谱柱为ZORBAX 300SB-C18(4.6 mm×250 mm,5-Micron),柱温45℃,上样量40 μg,流速0.7 mL/min,检测波长280 nm;流动相A为30％乙腈+0.1％三氟乙酸,流动相B为80％乙腈+0.1％三氟乙酸;梯度洗脱方法为0～10 min,10％B→50％B;10～50 min,50％B→90％B.rhGH-Fc的相关蛋白主要产生在4个氧化位点和2个脱酰胺位点处.建立的RP-HPLC检测方法重复性验证RSD为1.8％;蛋白缓冲液对检测结果无干扰;耐用性验证RSD为0.05％;在相同色谱柱条件下,不同设备、不同时间配制的流动相、不同柱温对检测结果无明显影响;方法检测限为0.01 mg/mL,定量限为0.025 mg/mL.结论 成功建立了rhGH-Fc相关蛋白含量的RP-HPLC检测方法,该方法重复性、专属性、耐用性良好,可用于rhGH-Fc相关蛋白含量的检测.
长效生长激素;反相高效液相色谱法;蛋白含量
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R917(药物基础科学)
吉林省科技发展计划项目20160204034YY
2022-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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