液相色谱质谱对重组人生长激素-Fc(CHO细胞)二硫键连接的确认

摘要：

目的 利用液相色谱质谱(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)对重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc二硫键连接进行确认.方法 液相色谱条件为色谱柱:CSHC18(2.1 mm×100 mm,130 (A),1.7μm);流动相A:100％水(含0.1％甲酸);流动相B:100％乙腈(含0.1％甲酸);流速:0.3 mL/min;柱温:65C;上样量:5μL,梯度洗脱.质谱条件:MSE采集模式;毛细管电压:2500 V;Cone电压:40V;去溶剂气体温度:350℃;源温:120℃;去溶剂气体流速:600 L/h;一级质谱扫描范围:100～2000 m/z.样品用8 mol/L盐酸胍于50℃变性30 min、1 mol/L碘乙酰胺室温烷基化0.5h,离心置换成50 mmol/L NH4CO3(pH 8.0)缓冲液后,用胰酶(w/w,1∶15)37 ℃酶解4h,利用LC-MS对酶解的肽段进行采集和分析.结果 确认rhGH-Fc二硫键连接为Cys53-Cys165,Cys182-Cys189,1∶Cys210-2∶Cys210,1∶Cys213-2∶Cys213,Cys245-Cys305,Cys351-Cys409,与理论连接一致.结论 建立了稳定的LC-MS方法分析rhGH-Fc的二硫键连接,可用于rhGH-Fc的常规分析.

关键词：重组人生长激素-Fc;二硫键;液相色谱质谱

所属期刊栏目：34

分类号：R977.1(药品)

资助基金：吉林省重点科技攻关项目20160204034YY

在线出版日期：2021-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1243-1247,1252