森林脑炎病毒单克隆抗体的研制及抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法的建立和应用
目的 制备森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)单克隆抗体,并建立TBEV抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,初步应用于疫苗生产过程中TBEV抗原含量监测.方法 以TBEV"森张"株灭活纯化全病毒作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备小鼠单抗杂交瘤及腹水抗体,纯化后鉴定单抗的特异性及相对亲和力.经单抗叠加ELISA配对,建立双抗体夹心ELISA病毒抗原检测方法.以TBEV抗原标准品作为定量标准,建立剂量-反应曲线,验证该方法的敏感度、线性、特异性、准确性、试验内与试验间精密性,对5批TBEV灭活疫苗原液进行检测,初步验证方法的适用性.结果 制备了4株抗TBEV杂交瘤细胞株:5F5、2G12、5E1及2H9;间接ELISA法测定腹水抗体效价为1∶106～1∶107,Western blot鉴定4株单抗均与TBEV包膜E蛋白发生特异性反应;4株单抗相对亲和力:2G12＞ 5F5＞ 2H9＞ 5E1;抗体配对筛选后,将5F5作为包被抗体,工作浓度为10 μg/mL;2G12作为标记抗体,稀释倍数为1∶3200倍.该方法对TBEV抗原最低检出限为0.0098 μg/mL;线性范围为0.0781～2.5μg/mL,R2＞0.98;检测TBEV疫苗生产相关原辅料成分无交叉反应;准确性验证病毒抗原回收率在96.2％ ～ 109.2％之间;试验内和试验间精密性变异系数分别在7.37％ ～ 8.40％、8.66％ ～9.38％之间;用该方法检测5批TBEV灭活疫苗原液呈剂量依赖关系.结论 成功制备了TBEV小鼠单克隆抗体,并建立了TBEV抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,该方法检测TBEV抗原准确可靠,为TBEV灭活疫苗研发及生产过程中病毒抗原检测提供了一种简便有效的监测方法.
森林脑炎病毒;单克隆抗体;双抗体夹心ELISA;抗原定量检测
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R373.3+1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
吉林省省级医药健康产业发展专项基金项目20170311010YY
2021-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
963-968,973
