牛病毒性腹泻病毒Npro基因克隆、生物信息学分析及其表达鉴定

摘要：

目的 研究牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea viruses,BVDV)N-端自身蛋白酶(Npro)的生物信息学特征及表达特性.方法 克隆NADL株BVDV Npro基因,利用生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、跨膜区、信号肽、二级及三级结构,并进行原核表达、纯化及鉴定.将纯化的重组Npro蛋白免疫昆明小鼠,制备鼠抗Npro蛋白多克隆抗体,采用ELISA法、间接免疫荧光试验及Western blot法进行多克隆抗体效价、特异性及蛋白反应原性检测.结果 PCR扩增的Npro基因全长504 bp,编码168个氨基酸,Npro基因与BVDV V026株属于同一分支.Npro蛋白属于外膜蛋白,有亲水性,无信号肽,二级结构以β折叠和无规则卷曲为主.重组表达质粒pET-28a-Npro经PCR及酶切鉴定正确,测序结果与原序列一致;表达的重组Npro蛋白相对分子质量约25000,纯化后纯度达95％以上,且免疫原性良好;制备的鼠抗Npro蛋白多克隆抗体效价为1∶128000,特异性良好.结论 成功在大肠埃希菌中表达了BVDV Npro蛋白,表达的Npro蛋白免疫原性良好,为进一步研究BVDV Npro蛋白的功能奠定了基础.

关键词：牛病毒性腹泻病毒;Npro蛋白;原核表达;生物信息学分析

所属期刊栏目：34

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：科技部十三五重点研发项目;黑龙江省科技厅项目

在线出版日期：2021-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：949-954