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重组猪尿酸氧化酶基因突变及其对聚乙二醇化的影响

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目的 对重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,rPUOX)进行突变改造,以增加rPUOX上可供聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)耦合的赖氨酸(Lys)残基数,探究PEG修饰对改造前后的酶液在SPF鸡体内的药效和抗原屏蔽作用的影响.方法 对纯化的基因改造前后的rPUOX进行PEG化修饰,修饰蛋白静脉注射SPF鸡,共4次,每次间隔7d.实验分为20×5K PEG-rPUOX-215组、20×5K PEG-rPUOX组和空白对照组(0.9%生理盐水).于鸡翼根静脉处采血,用血糖尿酸测试仪及尿酸测试条测定尿酸浓度,酶反应-紫外分光光度法检测尿酸酶活性,间接ELISA法检测免疫原性.结果 20×5K PEG-rPUOX-215和20×5K PEG-rPUOX均获得充分修饰,且前者修饰效果更好.第1、2次注射,降低鸡血尿酸幅度20×5K PEG-rPUOX-215组高于20×5K PEG-rPUOX组约11%和6%.3次注射药效维持时间20×5K PEG-rPUOX组相较于20×5K PEG-rPUOX-215组逐次降低0、24和48 h.20×5K PEG-rPUOX-215组抗体产生速率相对较慢,且14 d抗体阳性率低于20×5K PEG-rPUOX组约14.3%.结论 20×5K PEG-rPUOX-215修饰后药效学作用更显著,药物半衰期延长,且免疫原性相对较低,为研制低免疫原性的rPUOX及实现临床上多次给药提供了新的方法和思路.

重组猪尿酸氧化酶;聚乙二醇化;尿酸浓度;尿酸酶活性;免疫原性

34

Q816(生物工程学(生物技术))

国家自然科学基金31972646

2021-09-06(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共8页

941-948

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1004-5503

22-1197/Q

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