蔗糖异构酶Pal Ⅰ在枯草芽孢杆菌中的异源表达及应用

摘要：

目的 构建表达蔗糖异构酶Pal Ⅰ的枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800重组表达菌,并对其催化蔗糖转化的产物进行分析.方法 采用RF-clone方法扩增蔗糖异构酶PalⅠ基因(NCBI∶AY040843.1),克隆至pHT43载体,构建重组质粒pHT43-PalⅠ,转化至枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800中,构建菌株pHT43-PalⅠ/B.subtilis WB800,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的 蛋白蔗糖异构酶Pal Ⅰ的表达情况.在含2％、4％、8％、12％蔗糖的培养基中发酵pHT43-PalⅠ/B.subtilis WB800,HPLC分析发酵液中蔗糖异构酶Pal Ⅰ催化蔗糖转化的产物.结果 经PCR鉴定,重组质粒pHT43-PalⅠ及重组菌株pHT43-PalⅠ/B.subtilis WB800均构建正确.蔗糖异构酶Pal Ⅰ在B.subtilis WB800中成功分泌表达,其相对分子质量约为66400.在含12％蔗糖的培养基中,发酵液中蔗糖异构酶Pal Ⅰ可催化蔗糖转化为以异麦芽酮糖为主的二糖产物,其与单糖副产物的最大比值可达92:1.结论 成功构建了表达蔗糖异构酶Pal Ⅰ的枯草芽孢杆菌表达菌株,其可利用重组菌在含蔗糖培养基中直接发酵催化蔗糖的转化,降低副产物的含量.

关键词：蔗糖异构酶;枯草芽孢杆菌;异源表达;异麦芽酮糖

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分类号：TS245.9(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金31771907

在线出版日期：2021-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：923-927