非洲猪瘟多基因家族MGF-505-3R基因重组原核表达质粒的构建及表达

摘要：

目的 构建非洲猪瘟多基因家族MGF-505-3R基因重组原核表达质粒,并进行表达.方法 根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)MGF-505-3R基因CDS区序列设计特异性引物并进行PCR扩增,将目的 基因片段与原核表达载体pET-32A(+)连接,构建重组原核表达质粒pET-32A(+)-MGF-505-3R.对蛋白进行生物信息学分析后,将重组原核表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,用1 mmol/L IPTG于37℃诱导表达6h后,超声破碎菌体,获得的上清液经Ni-NTA亲和层析和CMSepharose FF阳离子交换层析纯化,BCA法测定蛋白产量.结果 重组原核表达质粒经菌液PCR、双酶切及测序证明构建正确.MGF-505-3R蛋白为不稳定的疏水蛋白,为跨膜蛋白,蛋白二级结构由无规卷曲、α螺旋和β折叠组成为主要结构,三级结构预测结果与二级结构预测相符.表达的重组蛋白相对分子质量约为33000,BCA法测定重组蛋白产量可达19.8 mg/L.结论 成功构建了MGF-505-3R基因重组原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为我国非洲猪瘟免疫血清学诊断试剂的制备及预防控制奠定了基础.

关键词：非洲猪瘟、MGF-505-3R基因、原核表达

所属期刊栏目：34

分类号：Q786;S828(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省下拨省级医药健康产业发展专项KCW-201802

在线出版日期：2021-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：694-698