麻疹疫苗株Schwarz反向遗传系统的建立
目的 建立麻疹疫苗株Schwarz(MVSW)反向遗传系统.方法 将MVSW全长cDNA分为F1 ～ F7共7个片段,在F1片段的5'端插入T7启动子及锤头核酸酶序列(hammerhead ribozyme,HamRz),F7片段的3'端插入T7终止子及丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,HdvRz),分别将F1 ～ F7片段克隆至pT7-MCS2载体上,7个重组质粒经酶切按顺序拼接MVSW全长cDNA,获得全长质粒pT7MVSW.同时构建表达MVSW核蛋白(N)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)的3个辅助质粒.将全长质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒(pT7-T7R NAP及pCDIBP-T7RNAP)共同电转染Vero细胞,拯救获得病毒rMVSWO收获的rMVSW在Vero及CEC细胞中进行传代培养,观察细胞病变、检测病毒滴度并进行病毒测序,同时免疫小鼠检测抗rMVSW中和抗体.结果 经酶切鉴定,全长质粒及辅助质粒均构建正确.拯救病毒rMVSW在Vero及CEC细胞培养的病变典型特征类似;P2代病毒rMVSW扩增片段与疫苗株MVSW理论序列一致;rMVSW经Vero细胞连续培养P2～ P10代病毒滴度稳定在5.5～6.5 lgCCID50/mL之间;rMVSW及疫苗株MVS191诱导的抗rMVSW抗体滴度接近.结论 成功建立了麻疹疫苗株MVSW的反向遗传系统,获得的具有良好遗传稳定性及免疫原性的拯救病毒rMVSW有作为疫苗生产用毒种的潜力.
麻疹病毒、疫苗株Schwarz、病毒拯救、反向遗传系统
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R373.1+6(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
2021-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
637-642
