蔗糖异构酶Pal Ⅰ-Cu2+纳米花固定化酶的制备及其结构、性能分析

摘要：

目的 制备蔗糖异构酶Pal Ⅰ-Cu2+纳米花固定化酶(简称蔗糖异构酶Pal Ⅰ-Cu2+纳米花),并分析其结构及性能.方法 用0.5 mmol/L IPTG诱导重组菌pET28a-Pal Ⅰ E.coli BL21(DE3)表达蔗糖异构酶Pal Ⅰ,纯化后结合Cu2+制备杂化蔗糖异构酶Pal Ⅰ-Cu2+纳米花,优化制备条件[磷酸盐缓冲溶液pH(6.0、7.4、8.0及9.0)、制备温度(4及25℃)及制备时间(12、24、48、72及120 h)].通过扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)及透射电子显微镜(tran-smission electron microscope,TEM)观察蔗糖异构酶Pal Ⅰ-Cu2+纳米花的形态结构,并分析其稳定性及循环利用性.结果 经SDS-PAGE分析,纯化的蔗糖异构酶Pal Ⅰ表达正确,其在pH 7.4的磷酸缓冲液中4℃反应48 h制备的蔗糖异构酶Pal Ⅰ-Cu2+纳米花具有最高酶活性.经SEM及TEM观察,蔗糖异构酶Pal Ⅰ-Cu2+纳米花结构为众多花瓣紧密排列的单一球状.游离的蔗糖异构酶Pal Ⅰ于4℃保存9 d后基本失活,蔗糖异构酶Pal Ⅰ-Cu2+纳米花于4℃保存15 d后酶活性仍保留80％的初始活性,其循环利用6次后,酶活性仍余40％.结论 成功制备了蔗糖异构酶Pal Ⅰ-Cu2+纳米花,其固定化结构明显提高了酶的稳定性,且具有较好的循环性能.

关键词：蔗糖异构酶、纳米花、固定化、酶活性

所属期刊栏目：34

分类号：TS245.9(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金;辽宁省教育厅科学研究项目

在线出版日期：2021-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：286-289,293