表达rhGH-Fc融合蛋白的CHO工程细胞的传代稳定性分析

摘要：

目的 分析表达重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc融合蛋白的CHO工程细胞的传代稳定性,确定细胞的生产稳定代次.方法 取表达rhGH-fc融合蛋白的CHO细胞(35代),连续传代建立50、70、90代细胞库.复苏各代次细胞并进行培养表达,绘制不同代次的细胞生长曲线,比较不同代次细胞在对数生长期的比生长速率;培养结束,对不同代次细胞表达的蛋白进行亲和层析纯化,比较其表达量,Western blot法对表达蛋白进行鉴定,通过对目的基因mRNA测序比较目的基因的稳定性.结果 50和70代细胞与35代相比,生长曲线基本重合,90代细胞曲线出现差异;50、70、90代细胞在对数生长期的比生长速率与35代相比,差异均无统计学意义(P＞0.05),但90代的P值已明显降低;50和70代细胞重组蛋白表达量与35代相比,差异均无统计学意义(P＞0.05),但90代细胞重组蛋白的表达量下降比例达42％;各代次细胞rhGH-Fc基因序列保持稳定,与理论一致.结论 表达rhGH-Fc融合蛋白的CHO工程细胞的生产稳定代次为70代,可满足后续研究和生产需要.

关键词：中国仓鼠卵巢细胞、重组人生长激素-Fc融合蛋白、传代稳定性

所属期刊栏目：34

分类号：R977.1(药品)

资助基金：吉林省科技发展计划项目20160204034YY

在线出版日期：2021-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：272-275