CD1d融合蛋白的表达及其在自然杀伤T细胞原代培养中的作用

摘要：

目的 构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-CD1d-hIgG1-BriAtag,建立稳定表达CD1d融合蛋白的细胞系,并检测该蛋白对体外培养人原代自然杀伤T(natural killing T,NKT)细胞的活化刺激功能,为肿瘤过继性免疫治疗提供新方法.方法 从健康人外周血提取CD1d全长基因作为目的DNA片段,与真核表达载体pcDNA3.1(-)分别经双酶切后,酶切产物用T4 DNA连接酶连接,获得重组表达载体,经转染293T细胞、抗性筛选、质粒提取等步骤获得融合的重组质粒.将双酶切鉴定正确的质粒采用磷酸钙转染法导人CHO-K1细胞,经Western blot和ELISA法检测CD1d蛋白的表达,连续培养获得稳定表达CD1d的细胞系,经扩增培养收获培养液后,进行Protien A柱纯化.将纯化的CD1d蛋白用于人外周血经体外分离获得的单个核细胞的连续培养后,进行流式细胞术检测.结果 质粒pcDNA3.1(-)-CD1d-hIgG1-BriA tag经双酶切鉴定构建正确.获得1株稳定表达CD1d蛋白的细胞株.纯化后的CD1d蛋白相对分子质量约196000,能够激活单个核细胞中NKT细胞的扩增,培养第8天,CD3+CD56+NKT细胞显著增加,由培养前的0.30％扩增至4.99％.结论 成功构建了pcDNA3.1(-)-CD1d-hIgG1-BriAtag真核表达质粒,建立了高效稳定表达CD1d蛋白的CHO-K1细胞株,为深入研究CD1d蛋白刺激活化NKT细胞奠定了实验基础,进一步证实了CD1d分子体外刺激NKT活化的功能,为最终免疫治疗提供了细胞.

关键词：CD1d基因、基因重组、真核表达载体、自然杀伤T细胞

所属期刊栏目：34

分类号：Q78;R34(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2021-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：155-160