鼠抗人间变性淋巴瘤激酶单抗及其试剂盒的制备及鉴定
目的 制备并鉴定鼠抗人间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)单抗及其试剂盒.方法 以人ALK重组蛋白免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备人ALK单抗,ELISA及免疫细胞化学(immunocytochemical,ICC)法筛选稳定分泌ALK 单抗的杂交瘤细胞株;SDS-PAGE 检测单抗纯度;蛋白定量测试检测单抗浓度;ELISA 方法检测单抗效价、亲和力;单抗亚类检测试剂盒鉴定单抗亚型;Western blot及免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)法鉴定单抗的特异性.IHC 方法筛选ALK单抗检测试剂盒配套的相关试剂,应用制备的ALK 单抗试剂盒及抗ALK(D5F3)兔单抗试剂(IHC 法)分别检测1 162 份临床样本.结果 共筛选出3 株稳定分泌ALK 单抗的杂交瘤细胞株,其中细胞株1A4在IHC检测非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)中ALK蛋白时表现强阳性.单抗1A4的浓度、效价及亲和常数分别为6.791 mg/mL、1∶51 200和2.75 x 109 L/moL,抗体亚型为IgG2b.在不同肺癌细胞系及过表达ALK 和其他基因的细胞裂解液中,单抗1A4仅识别ALK 蛋白,在多种NSCLC 病理组织样本中可鉴定出ALK 阳性的NSCLC,特异性高.选择EDTA 修复液(pH 9.0)、DAB 染色液(增强聚合物法)及中杉金桥生物科技有限公司的抗体稀释液作为试剂盒配套试剂.1 162份临床样本经ALK单抗试剂盒与抗ALK(D5F3)兔单抗试剂(IHC 法)检测的ALK 阳性及阴性结果一致性良好.结论 成功制备了特异性强的鼠抗人ALK单抗(1A4),该ALK单抗试剂盒与抗ALK(D5F3)兔单抗试剂(IHC 法)检测结果一致性良好,可用于NSCLC 中ALK 蛋白的检测.
间变性淋巴瘤激酶、非小细胞肺癌、单克隆抗体、免疫细胞化学、免疫组织化学
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Q511(蛋白质)
2021-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
58-63,68
