诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立汉逊酵母表达的重组诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法,并进行验证.方法 采用磁珠法提取汉逊酵母基因组DNA,获得标准品,建立qPCR标准曲线,并进行专属性、线性、准确度、精密度和耐用性验证.结果 专属性验证结果显示,与对照制剂(注射用水、缓冲液、Vero细胞和CHO细胞培养上清DNA)相比,建立的方法对汉逊酵母DNA具有特异性扩增曲线;线性验证中5次试验标准曲线相关系数(R2)均＞0.98;准确度验证试验不同浓度样品的加标回收率在95.12％～105.72％之间,均在70％～130％范围内;重复性和中间精密度验证试验相对标准偏差(RSD)均小于30％;耐用性验证中,Proteinase K不同消化温度下检测结果的RSD为20.75％,不同蛋白浓度供试品检测结果的RSD为27.11％,均符合《中国药典》三部(2015版)要求.结论 建立的方法专属性、线性、准确度、精密度和耐用性均符合要求,可用于检测重组诺如病毒类病毒颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗中残余宿主DNA.

关键词：残余宿主DNA、实时荧光定量PCR、重组诺如病毒VLP疫苗、汉逊酵母

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分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家科技重大专项2018ZX09739002-005

在线出版日期：2021-02-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1426-1430