乙型肝炎病毒核心蛋白在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

摘要：

目的 探讨在枯草芽孢杆菌中分泌表达乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核心蛋白(HBV core protein,HBc)的可行性.方法 PCR扩增HBc基因片段,插入pBE S-DNA穿梭质粒的MCS区域,构建重组质粒pBE S-DNA/HBc,将其线性化后与分泌信号肽DNA(SP DNA)连接产物转化大肠埃希菌Stellar感受态细胞,收获全部阳性菌落,并将提取的混合质粒转化至枯草芽孢杆菌RIK1285感受态细胞,ELISA法筛选分泌表达HBc蛋白的阳性菌落,选取分泌表达量最高的菌株放大培养,培养上清经亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE及Western blot分析重组蛋白HBc的分泌表达.结果 经双酶切和测序鉴定,重组质粒pBES-DNA/HBc构建正确.随机挑选的50株重组枯草芽孢杆菌经鉴定有16株含HBc基因,其中4株培养上清中检测到重组蛋白HBc的阳性表达.经SDS-PAGE分析,重组蛋白HBc在培养上清中呈单体、二聚体及多聚体状态;经Western blot分析,重组蛋白HBc能与HBc抗体特异性结合.结论 重组蛋白HBc在枯草芽孢杆菌中可实现分泌表达,并具有抗原活性.

关键词：乙型肝炎病毒、核心蛋白、枯草芽孢杆菌、分泌表达

所属期刊栏目：33

分类号：Q815(生物工程学(生物技术))

资助基金：重庆市基础与前沿研究计划项目;重庆市渝中区科技计划项目

在线出版日期：2021-02-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1370-1375