无内毒素污染的基因工程鼠源SINE RNA的制备

摘要：

目的 研究从大肠埃希菌宿主提取基因工程RNA同时去除内毒素的条件.方法 将串联的小鼠短散布核元件(short interspersed nuclear elements,SINE)B1插入pET-28a(pET)构建pET-B1×16反序质粒(pET-B1 as),转化大肠埃希菌BL21(DE3),获得pET-B1 as-DE3菌.用TRlzol法、SDS-热酚法、SDS-NaCl离心法和SDS-NaCl过滤法从pET-B1as-DE3菌制备基因工程RNA,Triton X-114相分离法进一步去除内毒素,检测制备的RNA中内毒素含量及RNA产量、纯度、完整性,并进行小鼠体内毒性试验和家兔热源试验.结果 TRlzol法制备的RNA产量低;SDS-热酚法制备的RNA中内毒素含量高;SDS-NaCl过滤法去除内毒素的效果优于SDS-NaCl离心法,同时具有较高的RNA产量及较好的RNA完整性.小鼠静脉注射用SDS-热酚法和SDS-NaCl过滤法制备的RNA,前者引起小鼠不良反应,后者未引起小鼠不良反应.用Triton X-114相分离能进一步去除由SDS-NaCl过滤法制备的RNA中的内毒素,家兔热源试验证明SDS-NaCl过滤法联合Triton X-114相分离法制备的RNA,其热原符合动物体内试验要求.结论 建立了用SDS-NaCl过滤法联合Triton X-114相分离法制备基因工程RNA的方法,可有效去除RNA中污染的内毒素.

关键词：基因工程RNA、鼠短散布核元件、反义RNA、内毒素

所属期刊栏目：33

分类号：R915(药物基础科学)

资助基金：国家自然科学基金;河北省自然科学基金;河北省大学生创新性实验计划

在线出版日期：2020-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1292-1300