GⅡ.4型人诺如病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的 制备抗GⅡ.4型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1单克隆抗体,并鉴定其生物学特性.方法 PCR扩增GⅡ.4型HuNoV VP1基因序列,将其插入至原核表达载体pGEX-5X-1中,构建重组质粒pGEX-5X-1-VP1,转化至E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并通过亲和层析纯化获得重组蛋白GST-VP1.利用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与经GST-VP1抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,通过间接ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,并进行纯化.采用间接ELISA法、Biacore法和Western blot法分别检测单克隆抗体的效价、亲和力及特异性.结果 经菌落PCR及测序鉴定,重组质粒pGEX-5X-1-VP1构建正确.重组蛋白GST-VP1相对分子质量约85000,大部分以可溶形式存在,纯化后浓度为1.100 mg/mL.筛选获得3株能分泌GⅡ.4型HuNoV VP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为NoV C1、NoV D9和NoV H6,效价均可达1∶107以上,亲和力常数KD(M)分别为4.422×10-、4.303×10-8、7.540×10-7 mol/L,均可与HuNoV VP1天然蛋白及GST-VP1重组蛋白发生特异性结合.结论 利用原核表达系统成功表达了GST-VP1蛋白,并通过杂交瘤技术制备了高效价的GⅡ.4型HuNoV VP1特异性单克隆抗体,为GⅡ.4型HuNoV免疫诊断和疫苗的研发奠定了基础.

关键词：诺如病毒、衣壳蛋白、基因重组、原核表达、单克隆抗体

所属期刊栏目：33

分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：云南省重大科技专项计划-生物医药重大专项;中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目

在线出版日期：2020-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1146-1151