多糖蛋白结合疫苗中残留ADH和EDAC同时定量检测的液相色谱串联质谱法的建立
目的 建立同时定量检测己二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺[N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodimide,EDAC]的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法,实现多糖蛋白结合物(肺炎球菌结合物、脑膜炎球菌结合物和b型流感嗜血杆菌结合物)中残留ADH和EDAC的定量研究.方法 通过检测EDAC在纯水、中性水溶液[(50 mmol/L磷酸缓冲溶液(pH 6.8)、200 mmol/L氯化钠水溶液和疫苗培养基)]及0.1％甲酸(formic acid,FA)水溶液中的稳定性,确定实现EDAC完全转换为EDU的前处理条件.优化了色谱柱种类对ADH、EDU和EDAC的保留,以及质谱条件如产物离子、碰撞电压、Q1和Q3电压等对ADH和EDU定量灵敏度的影响,建立以C18WCX(2.1 mm×150 mm,5μm)为固定相,pH2～3的0.1％ FA-水和0.1％FA-乙腈为流动相的LC-MS/MS方法,实现ADH和EDAC(实际检测对象为EDAC的转换产物EDU)的高灵敏度定量分析.对建立方法的精密度、准确度、线性范围、检出限(LOD)和定量限(LOQ)进行验证.结果 ADH在水溶液中较稳定,EDAC自溶解开始即水解为EDU,且难以完全转换,导致EDAC测定困难;在样品和标准品溶液中加入FA,可实现EDAC完全且快速的转换为EDU.ADH、EDU和EDAC在C18色谱柱上保留弱,在色谱柱的死时间附近出峰,无法实现这些化合物与样品基质的分离,而本文所选C 18WCX固定相可实现目标化合物的保留且峰形较好.通过前体离子扫描、产物离子扫描,选择目标化合物的前体离子和响应强度较好的产物离子作为MRM的离子对,并用MRM自动优化程序获得目标化合物的最佳Q1、CE和Q3电压值.建立的方法检测的ADH和EDAC含量与峰面积线性关系良好,R2均大于0.999;ADH的LOD为3.96 μg/L、LOQ为15.63 μg/L,EDAC的LOD为0.58 μg/L、LOQ为1.17 μg/L,灵敏度较高;精密度(峰面积RSD＜ 2％)及准确度(回收率为90％～105％)较高.结论 建立的LC-MS/MS方法实现了多糖蛋白结合疫苗中残留ADH和EDAC(通过测定EDU定量EDAC)的高灵敏度检测,与《中国药典》三部(2015版)方法相比,该方法预处理更简单,自动化程度更高且灵敏度更好,适合手多种多糖蛋白结合物中ADH和EDAC残留的检测.
液相色谱串联质谱、ADH、EDAC、肺炎球菌结合疫苗、脑膜炎球菌结合疫苗、b型流感嗜血杆菌结合疫苗
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O657.63(分析化学)
国家科技重大专项“重大新药创制”2018ZX09738-005
2020-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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