重组金黄色葡萄球菌疫苗特异性人血清IgG抗体Luminex系统多重检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立重组金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)疫苗特异性人血清IgG抗体的Luminex系统多重检测方法,并进行验证.方法 以重组SA疫苗所含的5种抗原(mHla、IsdB-N2、SpA5、mSEB、MntC)作为磁珠偶联蛋白,分别与相应磁珠偶联,加人参考血清(第3次免疫重组SA疫苗后21 d的志愿者血清,筛选出抗5种抗原特异性高效价血清8份,混合),37℃孵育;加入山羊F(ab')2抗人IgG-Fc (PE),37℃孵育;用Luminex系统进行多重检测,并对偶联抗原浓度、孵育时间、二抗稀释度进行优化.同时分析5种抗原间的干扰情况,并验证方法学的特异性、准确性及精密性.结果 mHla、IsdB-N2、SpA5、mSEB、MntC最适偶联浓度分别为30、150、7.5、2.5、7.5μg/2.5 mil,最适一抗及二抗孵育时间均为30 min,最适二抗稀释度为1∶5000.5种抗原间不存在明显的交叉表位,与特异的抗体反应过程无明显相互干扰.游离的重组蛋白对偶联抗原与抗体间反应的抑制率随着浓度的增加而增加,3种浓度的参考血清的回收率介于87.0％～120.8％之间,批内和批间CV值均＜10％.结论 成功建立并优化了重组SA疫苗特异性抗体的Luminex系统多重检测方法,且该方法具有良好的特异性、准确性及稳定性.

关键词：金黄色葡萄球菌、重组疫苗、Luminex液相芯片、血清抗体、多重抗体检测

所属期刊栏目：33

分类号：R378.1+1;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家重大专项课题2018ZX09101001

在线出版日期：2020-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1042-1047,1053