重组人抗TNFα单抗制品中CHO宿主细胞蛋白质残留夹心ELISA检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立检测重组人抗TNFα单抗制品中CHO宿主细胞蛋白质(host cell protein,HCP)残留的夹心ELISA法,并进行验证.方法 采用二维电泳-Western blot(2D-Western blot)法筛选兔抗CHO HCP多克隆抗体(产品号:AB000103-A、AB000103-C)及羊抗CHO HCP多克隆抗体(批号:3G-0016-PA)中识别重组人抗TNFα单抗特异性CHO HCP覆盖率最高的一种作为检测抗体,建立检测样品中残余HCP的夹心ELISA法,并验证方法的线性、基质干扰、稀释线性、灵敏度、精密度及准确性.结果 以覆盖率达57％的AB000103-C号兔抗CHO HCP多克隆抗体作为检测抗体;样品基质干扰HCP检测,样品需稀释6倍;HCP标准品浓度在3.33～810 ng/mL范围与A450值曲线拟合良好,R2=1,试验内及试验间精密性验证的CV均小于12％,检测限及定量限分别为2.4和20 ng/mL;20、150及300 ng/mL的加标样品回收率分别为99.5％、97.1％及100.3％.结论 成功建立了重组人抗TNFα单抗HCP残留的夹心ELISA检测方法,该方法灵敏度高,准确性、精密性及线性良好,适用于重组人抗TNFα单抗制品的残留HCP检测.

关键词：重组人抗TNFα单抗、CHO细胞、宿主细胞蛋白质、酶联免疫吸附测定

所属期刊栏目：33

分类号：R392-33

资助基金：国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目;广东省科技计划项目资助项目

在线出版日期：2020-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：925-928,933