牛传染性鼻气管炎病毒gD基因真核表达载体的构建及其在MDBK细胞中的表达

摘要：

目的 构建牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD基因的真核表达质粒,并在MDBK细胞中表达.方法 参照GenBank中BHV-1-gD基因序列,于上下游分别加入Kpn Ⅰ、BSTB Ⅰ双酶切位点,连接至真核表达载体pcDNA4-myc-His中,全基因合成重组质粒pcDNA4-gD-His,经双酶切及测序鉴定正确后,转染MDBK细胞,收集上清,镍柱纯化带有His标签的重组gD蛋白,对表达及纯化的蛋白进行间接免疫荧光及Dot blot鉴定.结果 质粒pcDNA4-gD-His经双酶切及测序鉴定证明构建正确.表达及纯化的重组gD蛋白相对分子质量约为61 000,纯化后的重组gD蛋白浓度为0.85 mg/mL.表达及纯化的重组gD蛋白均可与IBRV-gD单克隆抗体发生反应,具有良好反应原性.结论 已成功构建了pcDNA4-gD-His真核表达质粒,并在MDBK细胞系中成功表达,经验证重组蛋白具有良好的反应原性.

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒、gD基因、MDBK细胞、真核表达

所属期刊栏目：33

分类号：S852.65+3;Q786(动物医学（兽医学）)

资助基金：中央引导地方科技发展专项;黑龙江八一农垦大学校级研究生创新

在线出版日期：2020-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：894-897