HEV ORF2截短融合蛋白的原核表达及其免疫原性

摘要：

目的 原核表达3型戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)第2个开放阅读框(open reading frame 2,ORF2)截短融合蛋白(HEV3-179-Fe),并检测其免疫原性.方法 分别扩增HEV3-179和Fe蛋白基因片段,经Overlap PCR法连接并扩增,克隆至载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-HEV 179-Fe,将其转化感受态E.coli BL21(DE3),取阳性菌株,IPTG诱导表达融合蛋白HEV3-179-Fe,进行10％SDS-PAGE分析.目的蛋白经镍离子金属鳌合亲和层析纯化后,加入硫酸铵进行病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)重构,置电镜下观察.HEV3-179-Fe蛋白VLPs与氢氧化铝佐剂吸附后免疫小鼠,ELISA法测定效价,以评价HEV ORF2截短融合蛋白的免疫原性.结果 重组表达质粒pET-28a-HEV3-179-Fe构建正确.目的蛋白HEV3-179-Fe相对分子质量约40 000,主要以包涵体形式存在,表达量均达35％以上,纯度约95％,可与鼠抗HEV 3多抗发生特异性反应.硫酸铵重构后于电镜下可见直径约20 nm的VLPs,其免疫小鼠的血清效价达1∶4800000以上.结论 原核表达了HEV3-179-Fe,且在小鼠体内具有较好的免疫原性.本实验为以HEV ORF2-179蛋白为基础的VLPs基因工程疫苗的研发奠定了基础.

关键词：戊型肝炎病毒、基因重组、原核表达、截短融合蛋白、Fe蛋白、免疫原性

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分类号：R373.2+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：吉林省科技发展计划项目20130204014YY

在线出版日期：2020-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：880-884,889