新城疫病毒F蛋白与鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的共表达、纯化及免疫原性
目的 共表达新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F蛋白与鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis virus, IBV) S1蛋白,纯化并分析其免疫原性.方法 根据NCBI中NDV F及IBV S1片段基因序列,截取包含F及S1蛋白部分抗原表位基因片段,设计并合成引物,PCR扩增目的片段,依次连接至原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-32a-F-S1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达,并对IPTG浓度和诱导时间进行优化,SDS-PAGE分析目的蛋白可溶性;重组蛋白经Ni-NTA agarose层析纯化复性后,Westemblot法检测其反应原性.将14日龄雏鸡随机分F-S1、NDV F、IBV S1及PBS组,肌内免疫3轮,间隔10 d,每轮连续免疫5d,每日1次,100 μg/只,首次免疫后每隔7d采集血清,ELISA法检测雏鸡血清特异性IgG水平.结果 经双酶切鉴定,重组质粒pET-32a-F-S1构建正确.重组蛋白最适IPTG诱导浓度为0.2 mmol/L,时间为3h;其以包涵体形式存在,相对分子质量约为53 000;纯化的重组蛋白能与抗NDV及抗IBV阳性血清反应,浓度为1.04 g/L.雏鸡免疫7～49d,与PBS组比较,F-S1、NDV F及IBV S1组血清IgG水平均显著升高(P＜0.01).结论 成功制备了重组蛋白F-S1,该蛋白具有良好的反应原性,能诱导雏鸡机体产生体液免疫应答,为NDV F及IBV S1重组蛋白的后续应用奠定了基础.
新城疫病毒F蛋白、鸡传染性支气管炎S1蛋白、原核表达、纯化、免疫原性
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S855.3.6(动物医学（兽医学）)
国家自然科学基金;黑龙江省农垦总局重点科研计划项目;黑龙江八一农垦大学自然科学人才支持计划;黑龙江八一农垦大学学成引进人才科研启动计划;黑龙江八一农垦大学科研团队平台支持计划
2020-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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