miR-590-5p与信号传导及转录激活因子3的靶向作用关系及其对视网膜母细胞瘤Y-79细胞生长和转移能力的影响
目的 探讨miR-590-5p与信号传导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的靶向作用关系及其对视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB) Y-79细胞生长和转移能力的影响.方法 临床收集人RB组织样本和癌旁组织样本各20份,RT-PCR检测miR-590-5p和STAT3基因的转录水平,并分析两者的相关性.RT-PCR检测RB细胞株Y-79和SO-RB50及正常视网膜细胞株HREC中miR-590-5p基因的转录水平.荧光素酶报告基因试验检测miR-590-5p和STAT3的相互作用关系.将Y-79细胞分为Y-79、miR-NC、miR-590-5p mimic和miR-590-5p mimic+ STAT3组,转染相应的miRNA及载体,RT-PCR检测miR-590-5p和STAT3基因转录水平,Western blot 检测STAT3、增殖蛋白Ki67、活化半胱天冬酶(cleave caspase-3,cl-caspase-3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)蛋白表达水平,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 与正常视网膜组织比较,RB组织中miR-590-5p基因转录水平显著降低,STAT3基因转录水平显著升高(P＜0.01),且miR-590-5p与STAT3基因转录水平呈负相关(r=-0.883 5,P＜0.001).与正常视网膜细胞比较,SO-RB50和Y-79细胞miR-590-5p转录水平显著降低(P＜0.01),从中选取miR-590-5p转录水平最低的Y-79细胞进行后续试验.与Y-79组比较,miR-590-5p mimic组miR-590-5p表达水平显著升高,STAT3基因转录和蛋白表达水平显著降低,细胞增殖水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ki67、VEGF、MMP-9蛋白表达水平显著降低,cl-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P＜0.01);与miR-590-5p mimic组比较,miR-590-5p mimic+ STAT3组STAT3蛋白表达水平显著升高,细胞增殖水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ki67、VEGF、MMP-9蛋白表达水平显著升高,cl-caspase-3蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).与STAT3 WT+ miR-NC组比较,STAT3 WT+ miR-590-5p mimic组荧光素酶活性显著降低(P＜0.01).结论 miR-590-5p可通过靶向作用于STAT3,抑制RB Y-79细胞的生长和转移能力.
视网膜母细胞瘤、Y-79细胞株、miR-590-5p、信号传导及转录激活因子3、生长、转移
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R774.1(眼科学)
陕西省自然科学基础研究计划2017JQ8048
2020-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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