肿瘤相关基因AMER1不同功能段表达载体的构建及其在人肺腺癌A549细胞中的表达
目的 构建APC膜结合蛋白1(APC membrane recruitment protein 1,AMER1)基因不同区域片段重组质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的表达.方法 以人基因组DNA为模板,PCR扩增AMER1基因不同功能区域片段2-1135AA、2-327AA、2-785AA、327-785AA、785-1135AA及327-1135AA,扩增片段分别经T4 DNA酶与EGFP-N1载体连接,构建AMER1不同功能片段重组质粒,产物分别转化至感受态E.coli DH5α中,提取阳性克隆进行双酶切及测序鉴定;用脂质体2000介导各重组质粒转染肺腺癌A549细胞,同时设转染空载体EGFP-N1为对照组,q-PCR法检测AMER1不同功能区域片段mRNA转录水平.结果 经双酶切及测序鉴定,AMER1不同功能区域片段重组质粒构建正确;与对照组比较,A549细胞中6个重组质粒AMER1基因mRNA转录水平均显著升高(P均＜0.01).结论 成功构建了AMER1基因不同功能片段截短子重组质粒,并在A549细胞中高表达,为进一步研究AMER1不同功能区域在肺腺癌中的作用及相关分子机制提供了生物学工具.
APC膜结合蛋白1基因、功能域、肺腺癌、A549细胞、基因组DNA
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R34(人体生物化学、分子生物学)
山西省自然科学基金“HBx蛋白在IgA肾病合并乙型肝炎病毒感染病变机制的研究”2015011093
2020-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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