潮汐式生物反应器CelCradleTM培养轮状病毒工艺的建立

摘要：

目的 建立潮汐式生物反应器CelCradleTM培养轮状病毒的工艺.方法 利用500 mL的潮汐式生物反应器CelCradleTM培养Vero细胞,通过葡萄糖含量监测及活细胞计数进行换液,待活细胞数目达2.75×109个时,分别按0.01、0.05、0.1和0.2 MOI接种轮状病毒ZTR-68株,于37℃,5％ C02培养箱中培养7d,每天取样,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测病毒基因组核酸带型,免疫荧光法检测病毒增殖情况,透射电镜观察病毒的形态结构,蚀斑法检测病毒滴度,确定生物反应器CelCradleTM培养轮状病毒的最适MOI.结果 在CelCradleTM反应器中接种3×108个Vero细胞,经7d培养,活细胞数目可达2.75×109个;以0.05 MOI轮状病毒ZTR-68接种Vero细胞的病毒基因组带型与转瓶培养的保持一致,感染后3～5d,轮状病毒荧光阳性细胞数目最多,电镜下可见形态结构完整的轮状病毒颗粒;以0.05 MOI接种轮状病毒ZTR-68株96 h病毒滴度最高,为7.7 LogPFU/mL.结论 初步建立了潮汐式生物反应器CelCradleTM培养轮状病毒的工艺,为进一步大规模生产轮状病毒灭活疫苗奠定了实验基础.

关键词：潮汐式生物反应器、轮状病毒、Vero细胞

所属期刊栏目：33

分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：中国医学科学院与健康科技创新工程协同创新团队项目中国医学科学院基金;云南省重大科技专项生物医药云南省自然科学基金2018ZF006

在线出版日期：2020-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：554-557,562