重组人骨形态发生蛋白7成熟蛋白在悬浮CHO-S细胞中的稳定表达

摘要：

目的 在悬浮CHO-S细胞中稳定表达重组人骨形态发生蛋白7(recombinant human bone morphgenetic protein 7,rhBMP7)成熟蛋白.方法 应用RT-PCR技术从BALB/c乳鼠股骨组织扩增mbmp7基因,克隆至质粒pMD18-T,通过定点突变3个氨基酸编码序列(G266S、S287N、D359E),得到重组克隆质粒pMD18-mbmp7m3;将mbmp7m3克隆至表达载体pCH01.0,构建重组表达质粒pCHO-mbmp7m3,转染CHO-S细胞,利用嘌呤霉素和甲氨蝶呤进行两轮加压筛选,有限稀释法筛选单克隆细胞,ELISA法检测rhBMP7成熟蛋白的表达.结果 从乳鼠股骨组织扩增的cDNA经测序与GenBank中登录的序列完全一致,点突变后测序与设计完全一致.获得了稳定表达rhBMP7成熟蛋白的单克隆细胞株,最高表达量为202 ng/ mL.结论 成功利用改造的mbmp7基因在CHO-S细胞中表达了rhBMP7成熟蛋白,为后续该制品工艺开发及产业化奠定了基础.

关键词：重组人骨形态发生蛋白7、定点突变、中国仓鼠卵巢细胞

所属期刊栏目：33

分类号：R392

在线出版日期：2020-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：501-506