森林脑炎病毒包膜E蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性初步评价

摘要：

目的 原核表达及纯化森林脑炎病毒(tick-bome encephalitisvirus,TBEV)包膜E蛋白,并初步评价其免疫原性.方法 采用RT-PCR法扩增TBEV E蛋白基因,克隆至载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-TBEV E,转化感受态E coli BL21(DE3),挑取阳性克隆,扩增后经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导,表达产物经12％ SDS-PAGE及Western blot鉴定.将鉴定正确的重组蛋白采用镍柱亲和法纯化,铝佐剂吸附后,经小鼠左侧腹腔注射,0.5 mL/只,间隔1周加强免疫1次,末次免疫后7、14、21、28、35、42、49d,经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法测定小鼠血清抗体水平.结果 经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-28a-TBEV E构建正确.表达产物相对分子质量约55 000,主要以包涵体形式表达,表达量约22.3％,且可与小鼠抗TBEV血清发生特异反应,纯化后纯度达90％.末次免疫后21d,小鼠血清抗体效价达最高,为1∶6 400.结论 经原核表达系统成功表达并纯化了TBEV E蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,本实验为TBEV诊断制剂及基因工程疫苗的研发奠定了基础.

关键词：森林脑炎病毒、包膜E蛋白、基因重组、原核表达、免疫原性

所属期刊栏目：33

分类号：R373.2+3;Q75(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：吉林省省级医药健康产业发展专项基金项目20170311010YY

在线出版日期：2020-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：489-492,497