O型口蹄疫病毒血清抗体竞争ELISA检测方法的建立及验证

摘要：

目的 建立O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)血清抗体的竞争ELISA检测方法,并进行验证.方法 采用O型FMDV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)作为包被抗原,建立用于检测FMDV血清抗体的竞争ELISA方法.对方法的抗原包被浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 μg/mL)、抗原包被温度及时间(4℃过夜、37℃ 1 h、37℃1.5 h、37℃2h、37℃2.5h、37℃3h)、血清稀释度(1∶2、1∶4、1∶8、1∶16稀释)、HRP-IgG稀释度(1∶10 000～1∶20000稀释)、封闭液种类(不封闭、1％ BSA封闭、2％ BSA封闭、5％脱脂乳封闭)、封闭液作用时间(30、60、90、120 min)、血清与HRP-IgG作用时间(30、60、90、120、150 min)、底物TMB作用时间(1O、15、20、25、30 min)进行优化.同时验证方法的交叉反应、特异性及敏感性、精密性.采用建立的方法及O型FMDV抗体液相阻断ELISA检测试剂盒分别检测未知血清背景的138份猪和牛血清,计算两者的符合率.结果 方法最适检测条件为:抗原包被浓度0.5 μg/mL,抗原包被温度及时间为4℃过夜,血清稀释度为1:4;HRP-IgG稀释度为1:18 000;封闭液为1％ BSA,封闭液作用时间为30 min;HRP-IgG与血清作用时间为30 min;底物作用时间为10 min.21份不同猪病的阳性血清中,除3份O型FMD阳性血清为阳性外,其他血清样品为阴性,该方法无交叉反应;敏感性为90.4％,特异性为95.7％;批内和批间精密性试验变异系数(CV)均＜10％.该方法与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的符合率为97％.结论 建立的方法具有良好的特异性及精密性,且操作简便,可用于O型FMDV血清抗体的检测.

关键词：O型口蹄疫病毒、病毒样颗粒、血清抗体、竞争ELISA法

所属期刊栏目：33

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目

在线出版日期：2020-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：438-444