重组人淋巴细胞活化基因-3蛋白胞外段的真核表达及鉴定

摘要：

目的 真核表达重组人淋巴细胞活化基因-3 (lymphocyte activation gene-3,LAG-3)蛋白胞外段,并进行鉴定.方法 用植物血球凝集素(phytohaemagg lutinin,PHA)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测Jurkat细胞中LAG-3蛋白的表达;提取Jurkat细胞总mRNA,RT-PCR法扩增人LAG-3蛋白胞外段基因片段,同时在蛋白C-末端引入His标签,将其克隆入载体pcDNA3.1+,构建重组质粒,转染Expi293F真核细胞,当细胞活率低于50％时收获细胞上清,经镍柱亲合层析纯化.纯化产物进行4％～20％ SDS-PAGE、HPLC及Western blot分析,BCA法测定浓度.结果 经菌液PCR、双酶切及测序鉴定,表明质粒构建正确.重组表达蛋白的相对分子质量约60 000,纯化后纯度达95％以上,与鼠抗LAG-3单克隆抗体可发生特异性结合,浓度为2.4 mg/mL.结论 成功构建了重组真核表达质粒LAG-3/pcDNA3.1+,并于Expi293F细胞中表达,纯化获得了纯度较高的LAG-3蛋白,为后期LAG-3蛋白的相关研究及其单抗的制备奠定了基础.

关键词：人淋巴细胞活化基因-3、基因重组、真核表达、Expi293F细胞

所属期刊栏目：33

分类号：R392.11

在线出版日期：2020-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：390-394