重组人肠道病毒71型病毒样颗粒疫苗外源DNA残留量检测方法的建立

摘要：

目的 建立重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗原液中昆虫细胞宿主DNA残留的地高辛探针杂交检测方法.方法 抽提昆虫细胞sf9基因组DNA,经分子筛纯化后作为阳性对照品;分别以1 000～5 000 bp和100～1000bp的基因组DNA超声随机小片段为模板,制备地高辛探针,与阳性对照进行杂交试验.同时验证方法的检测范围、灵敏度和特异性,并采用该方法对3批重组EV71 VLPs疫苗原液中宿主DNA残留量进行测定.结果 纯化后DNA样品浓度为47.5 ng/ μL,A260/A280值为1.86,可作为阳性对照.以100～1 000 bp DNA超声随机小片段作为模板,探针标记效率更高,杂交显色更清晰.该法检测范围为10 pg～ 10 ng,灵敏度达1 pg,特异性强.3批重组EV71 VLPs疫苗原液中每人份剂量的宿主细胞DNA残留均＜50 pg.结论 本实验建立的方法特异性强,灵敏度高,可用于重组EV71 VLPs疫苗制备过程中的原液检定及质量控制.

关键词：地高辛探针杂交、DNA残留、昆虫细胞、重组人肠道病毒71型、病毒样颗粒

所属期刊栏目：33

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技发展计划20160209016YY

在线出版日期：2020-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：308-311,315