表达人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体的重组CHO细胞传代稳定性评价
目的 评价表达人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体(简称抗VEGF单抗)的重组CHO细胞(K11细胞)传代稳定性.方法 细胞培养瓶中进行K11细胞连续传代,于培养1、4和7个月时测定K11细胞的倍增时间、单细胞抗体表达量和基因拷贝数.在传代培养过程中,分别于传代培养2、3、4、5和7个月时将K11细胞接种至全自动生物反应器中进行发酵培养,测定发酵培养产物的单抗表达量,测序单抗轻、重链基因;采用三步层析(亲和、阴/阳离子交换层析)纯化人源化抗VEGF单抗,分析人源化抗VEGF单抗的纯度、电荷异质性、一级结构和生物学活性.结果 K11细胞在细胞培养瓶中连续传代培养1、4和7个月时,对数生长期K11细胞的倍增时间分别为25、23和34 h,单细胞抗体表达量分别为15.6、15.0和11.5 pg/(个·d),单细胞基因拷贝数分别为200、219和204 copies/个.生物反应器发酵培养5批单抗,纯化后单抗表达量为1.18～2.06 g/L,K11细胞单抗轻、重链基因测序结果均与理论序列一致,人源化抗VEGF单抗SEC-HPLC单体纯度为96.23％～98.21％,电荷异质性和一级结构相似,生物学活性为(0.859～0.901)×104 U/mg.结论 K11细胞在工业化生产规模的培养周期内保持稳定,可满足人源化抗VEGF单抗的商品化的生产需要.
血管内皮生长因子、人源化单克隆抗体、重组CHO细胞、稳定性
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R979.1+9;R392-33(药品)
2020-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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