实验设计法在优化表达Fc融合蛋白的CHO细胞发酵培养工艺中的应用
目的 通过实验设计(Design of Experiments,DOE)分析优化重组CHO细胞在生物反应器中的培养工艺.方法 以2L生物反应器控制参数温度(T)、pH及溶氧(dissolved oxygen,DO)作为变量,以蛋白表达量、蛋白纯度及蛋白唾液酸含量为响应变量,应用Design Expert 10软件进行3因素2水平DOE拟合分析,筛选最适表达Fc融合蛋白的CHO细胞发酵培养工艺参数,并采用5L生物反应器进行验证.结果 蛋白表达量仅与T有关,且呈成正相关,pH和DO对其无显著影响,T与pH对其有交互作用;蛋白纯度受T和pH影响显著,T呈负相关,pH呈正相关,DO对其无显著影响,T与pH对其有交互作用;唾液酸含量受T和pH影响显著,T呈正相关,pH呈负相关,DO对其无显著影响.最适工艺参数确定T为(34±0.5)℃,pH为(7.05±0.02),DO为(45±5)％.采用最适工艺参数的反应器与优化前工艺比较,活细胞密度(viable cell density,VCD)增加;蛋白表达量、蛋白纯度、唾液酸含量分别提高了29.7％、8％和87.9％.结论 通过DOE方法快速优化了生物反应器培养表达Fc融合蛋白的CHO细胞的工艺参数,在不降低蛋白产量及纯度的前提下,极大提高了融合蛋白唾液酸含量.
实验设计、唾液酸、Fc融合蛋白、CHO细胞、蛋白纯度
33
G312(科学研究工作)
2020-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
66-70,75
