大鼠血清中抗轮状病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立及验证
目的 建立大鼠血清中抗轮状病毒(rotavirus,RV)IgG抗体的间接ELISA检测方法,并进行验证.方法 以兔抗RV多抗血清作为包被抗体,RV作为检测抗原,建立抗RV IgG抗体间接ELISA检测方法.棋盘滴定法优化包被抗体浓度(1∶1 000～1∶1 024 000)和血清浓度(1∶20～1∶2560),直接ELISA法优化生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度(1∶1 000～1∶128000稀释).采用优化的间接ELISA法检测39份RV抗体阴性大鼠血清样品,样品A450均值加上3倍标准差作为该检测条件的阴阳性判定界值.同时对该方法的专属性、检测限、耐用性进行验证.分别采用建立的方法及荧光灶形成单位(fluorescent focus-forming unit,FFU)方法检测96份临床前安全性评价试验样品,评价二者的符合率.结果 建立的间接ELISA法的最适反应条件为:包被抗体稀释倍数为1∶8 000,血清稀释倍数为1∶80,生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度为1∶4000,阴阳性判定界值为0.105.方法 检测限为0.031,且具有良好的专属性及耐用性.建立的方法与FFU方法检测结果的符合率达95.8％.结论 成功建立了抗RV IgG抗体的间接ELISA检测方法,且方法准确可靠,为临床前安全性评价试验提供了一种简便的血清学诊断方法.
轮状病毒、IgG抗体、间接ELISA法
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R392-3
科技部863项目2012AA02A401;湖北省技术创新专项重大项目2018ACA120
2020-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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