甲型肝炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及在贝类检测中的应用
目的 建立甲型肝炎病毒(hepatitis A,HAV)荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测方法,用于贝类中HAV的检测.方法 选择HAV高度保守的5'UTR区设计引物及探针,以HAV质粒为标准品,HAV活病毒为样本,建立HAV qRT-PCR检测方法;验证该方法的特异性、灵敏度、重复性、准确性及中间精密度;采用建立的方法检测HAV活病毒和贝类样本,并与我国贝类HAV检测国标方法(GB/T22287-2008法)进行比较.结果 通过14对引物探针分别对HAV质粒(101～ 108拷贝/μL)检测结果的比较,选择灵敏度最优的Pan1引物,建立了HAV qRT-PCR检测方法(PAN法).PAN法对CVA16、CVB3、EVA71、PV等11种RNA病毒均无阳性扩增;灵敏度达10 TCID50/mL;检测2.699 ～5.699 LgTCID50/mL各浓度HAV活病毒的回收率为82.9％ ～ 127.0％,单人和双人检测的变异系数分别为3.0％ ～7.0％和2.6％ ～8.4％.PAN法检测HAV活病毒的灵敏度(10 TCID50/mL)优于GB/T22287-2008法;两种方法对20份贝类样本的检测结果均为阴性,符合率为100％.结论 建立的PAN法具有良好的特异性、灵敏度、准确性、重复性和中间精密度,可用于贝类样本中HAV的核酸定量快速检测.
甲型肝炎病毒、荧光定量RT-PCR、贝类
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R373.2+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
贝类中致病微生物富集过程及控制技术2017YFC1600703
2020-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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