不同硫代修饰CpG ODN佐剂活性的比较
目的 评价相同序列不同硫代修饰CpG ODN佐剂联合重组乙型肝炎疫苗表面抗原(rHBsAg)在BALB/c小鼠中的免疫原性,及在HEK-BlueTM hTLR9细胞上的活性.方法 将4种(全硫代修饰的QCX1、部分硫代修饰的HS1和HS2及非硫代修饰的NS)CpG ODN及其阳性对照(全硫代修饰的CPG7909)按照相同配比分别与rHBsAg混合,使CpG ODN和rHBsAg终浓度均为20 μg/mL,同时设等剂量抗原对照组(rHBsAg)及空白对照组(生理盐水).分别肌肉免疫BALB/c小鼠,每只100 μL,于免疫后l、2、4周摘眼球采血后处死小鼠,分离血清,应用化学发光微粒子免疫分析技术检测乙型肝炎病毒表面抗体(antibody to hepatitis B virus surface antigen,Anti-HBs)水平;取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNCs),应用ELISPOT技术检测抗原特异性IFNγ、IL-2的分泌水平.体外应用HEK-BlueTM hTLR9细胞,检测4种CpG ODN及阳性对照CPG7909在该细胞上的活性,以及血清中放置不同时间后在该细胞上的活性.结果 免疫后1、2、4周,各组小鼠血清Anti-HBs水平逐渐升高,其中免后2、4周,QCX1组小鼠血清抗体水平高于抗原对照、HS1、HS2、NS组;QCX1组小鼠MNCs在rHBsAg刺激下,分泌IFNγ和IL-2的能力显著高于HS1、HS2、NS和抗原对照组(P均＜0.01);QCX1和HS2组刺激HEK-BlueTM hTLR9细胞活性的半数有效浓度(EC50)分别为5.94和6.52 μg/mL,明显低于HS1(46.54 μg/mL)和NS组(49.10 μg/mL);随着不同硫代修饰CpG ODN在血清中放置时间的延长,仅全硫代修饰QCX1和CPG7909组细胞培养物A655基本不变,其他组均出现不同程度降低.结论 全硫代修饰组QCX1佐剂增强小鼠细胞和体液免疫的能力与CPG7909相当,且在HEK-BlueTM hTLR9细胞上呈现较好的活性,在血清中也具有较好的稳定性.
CpG ODN、佐剂、硫代修饰、乙型肝炎疫苗、活性
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R392.9
国家“十三五”新药创制科技重大专项“创新生物技术药评价及标准化关键技术研究”2018zx09101001
2020-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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