柱前衍生HPLC法测定人凝血因子Ⅷ中氨基酸的含量
目的 建立人凝血因子Ⅷ中氨基酸含量的柱前衍生HPLC检测方法.方法 采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimide carbamate,AQC)在一定条件下与氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),再通过高效液相色谱仪,采用氨基酸分析柱(150 mm×3.9 mm,4μm)检测,以不同流动相进行梯度洗脱[在《中国药典》三部(2015版)的基础上进行调整],柱温为37℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为248 nm.同时验证方法的系统适应性、专属性、线性范围、精密性及准确度.结果 甘氨酸及盐酸赖氨酸均可在25 min内获得较好分离,与相应相邻色谱峰之间的分离度均＞1.5,拖尾因子在0.95～1.40之间;各样品的氨基酸种类均能正确检出,混合样品与单纯样品出峰时间保持一致,且供试品溶液与对照品溶液主峰保留时间相对偏差均＜2％;当甘氨酸浓度在12.5～62.5μg/mL,盐酸赖氨酸浓度在4.0～20.0μg/mL时,与相应氨基酸与内标峰面积比呈良好的线性关系,相关系数(r)分别为0.999 9和0.999 8;甘氨酸及盐酸赖氨酸重复性的相对标准偏差(RSD)分别为0.4％和0.5％,中间精密度RSD分别为1.3％和1.o％;两种氨基酸的回收率均在95％～105％范围内,RSD均≤2％.结论 建立的方法具有良好的专属性、精密性及准确度,可用于测定人凝血因子Ⅷ中的氨基酸含量.
人凝血因子Ⅷ、氨基酸含量、柱前衍生化、HPLC、甘氨酸、盐酸赖氨酸
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R917(药物基础科学)
2020-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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1402-1406,1410
