重组人睫状神经营养因子突变体及其聚乙二醇修饰物的制备及其对ob/ob肥胖小鼠体重、糖脂代谢的影响
目的 制备重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor, rhCNTF)突变体[rhCNTF(R6315)]及其聚乙二醇修饰物[P-rhCNTF(R6315)],探讨两者对ob/ob肥胖小鼠体重及糖脂代谢的影响.方法 采用rhCNTF(R6315)突变体工程菌株E.coli BL21(DE3)表达rhCNTF(R6315),经硫酸铵沉淀、Butyl HP和Q HP纯化后采用PEG修饰剂Y-40KD-MAL-mPEG对其C17游离巯基进行定点修饰,经QH P层析纯化获得P-rhCNTF(R6315).上述产物进行SDS-PAGE、纯度、修饰率、二级结构表征、修饰位点、体外活性、体内药代动力学检测.将ob/ob小鼠分为P-rhCNTF(R6315)组(0.05、0.1、0.2 mg/kg)、rhCNTF(R6315)组及赋形剂组,均采用高脂饲料喂养,同时设C57BL/6J组(普通饲料喂养C57BL/6J小鼠),检测各组小鼠的体重、摄食量及糖脂代谢情况.结果 rhCNTF(R6315)及P-rhCNTF(R6315)纯度分别为97.4％和99.3％,平均比活分别为9.5×105和6.9×105 IU/mg,相对比活分别为100％和72.6％;rhCNTF(R6315)修饰率达90％以上,大多数为单修饰产物,PEG修饰未影响rhCNTF(R6315)的二级结构,修饰位点发生在DLCSR肽段的C17上;P-rhCNTF(R6315)经皮下及静脉途径给药的血药浓度均在注射后约72 h降至给药前水平.与赋形剂组比较,P-rhCNTF(R6315)0.05、0.1、0.2 mg/kg剂量组小鼠在疗程结束时体重组分别减轻了10％、11％和21％(P＜0.05),rhCNTF(R6315)组减轻了30％(P＜0.01);治疗后15 d, rhCNTF(R6315)及P-rhCNTF(R6315)各剂量组小鼠摄食量明显降低(P＜0.05),随后逐渐恢复正常水平;P-rhCNTF(R6315)各剂量组从给药后8 d起,小鼠随机血糖有所降低,呈一定的量效关系,rhCNTF(R6315)组从给药后4 d开始有所下降;P-rhCNTF(R6315)0.2 mg/kg剂量组和rhCNTF(R6315)组的口服糖耐量(oral glucose resistant test, OGTT)曲线下面积(AUC0-2h)及腹腔内脂肪重量显著降低(P＜0.05),rhCNTF(R6315)及P-rhCNTF(R6315)各剂量组小鼠皮下脂肪均显著降低(P＜0.01).结论 制备了较高纯度的rhCNTF(R6315)及P-rhCNTF(R6315),两者对ob/ob肥胖小鼠的体重过高、高血糖症,体脂重量过高均具有良好的疗效,且P-rhCNTF(R6315)更长效.
重组人睫状神经营养因子、突变体工程菌、定点聚乙二醇修饰、肥胖、脂肪代谢、糖代谢
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Q819(生物工程学(生物技术))
北京市科委生物医药与生命科学创新培育研究-创新品种临床前研究专项;国药集团新产品开发基金
2020-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
1361-1369
