人乳头瘤病毒52型L1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的优化表达、纯化及其免疫原性
目的 利用毕赤酵母系统表达人乳头瘤病毒52型(human papillomaviruses 52,HPV52)L1蛋白,并检测其病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的免疫原性.方法 采用同义密码子替换的方法对HPV52 L1蛋白的野生型基因进行密码子优化,并在体外构建多拷贝表达质粒,经转化和筛选获得在毕赤酵母系统中高表达的HPV52 L1 VLP菌种.采用15 L发酵罐大规模培养,菌液破碎上清经阳离子交换层析和分子筛排阻层析两步法纯化,获得HPV52 L1 VLP.动态光散射和透射电子显微镜观察HPV52 L1 VLP的大小和形态,假病毒中和试验检测HPV52 L1 VLP在小鼠及大鼠体内的免疫原性.结果 HPV52 L1 VLP在溶液中呈较均一的单一组分,水合粒径为91.37 nm;镜下观察呈均一的、直径约50 nm的球状空心颗粒,大小与HPV52天然病毒颗粒相近.HPV52 L1 VLP相对分子质量约56 000,纯度达95％以上,产量为3.6 mg/L,且可与小鼠抗HPV L1多克隆单抗发生特异性结合.HPV52 L1 VLP在小鼠体内的半数有效剂量(ED50)为0.010 μg,在大鼠体内诱导产生的中和抗体滴度高达106.结论 于毕赤酵母系统成功表达了HPV52 L1 VLP,且具有良好的免疫原性,为相关预防性疫苗的研发奠定了基础.
人乳头瘤病毒52型、L1蛋白、病毒样颗粒、毕赤酵母、免疫原性
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Q786(基因工程（遗传工程）)
2020-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
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